Residu Nitroimidazol dalam Daging Babi: Metode LCMS-TQ9200 LC-MS/MS Wanyi Divalidasi sesuai GB 31658.23-2022
2026-10-21
Nitroimidazol adalah obat antibakteri dan antiprotozoa sintetis yang efektif menghambat bakteri anaerob dan trikomonad. Dulu banyak digunakan pada ternak dan akuakultur untuk mengendalikan infeksi pencernaan dan penyakit protozoa, sehingga meningkatkan angka kelangsungan hidup. Namun, obat induk dan metabolitnya terbukti toksik: obat-obat ini cepat dimetabolisme dalam hewan menjadi beberapa metabolit aktif, beberapa di antaranya bertahan di jaringan jauh lebih lama daripada senyawa induknya.
Studi toksikologi menunjukkan bahwa senyawa induk nitroimidazol dan metabolit utamanya berpotensi karsinogenik, mutagenik, dan genotoksik. Residu dalam makanan yang berasal dari hewan masuk ke dalam tubuh manusia melalui rantai makanan, dan asupan dosis rendah jangka panjang dapat mengganggu hematopoiesis, merusak kromosom, dan meningkatkan risiko mutasi gen. Oleh karena itu, Tiongkok telah melarang nitroimidazol pada hewan penghasil pangan, dan tidak ada residu yang diizinkan dalam makanan yang berasal dari hewan, sehingga pengujian residu yang akurat menjadi penting untuk keamanan pangan.
GB 31658.23-2022, standar keamanan pangan nasional untuk residu nitroimidazol dalam makanan yang berasal dari hewan menggunakan kromatografi cair tandem spektrometri massa, adalah dasar hukum untuk pekerjaan ini. Standar ini mencakup obat induk dan metabolit dalam matriks sapi, domba, dan hewan lainnya. Laboratorium pengujian membutuhkan alur kerja yang tervalidasi untuk daging babi yang mencakup empat senyawa target - metronidazol, hidroksimetronidazol, dimetridazol, dan hidroksidimetridazol - termasuk metabolit hidroksi yang lebih sulit ditahan dan diionisasi, pada tingkat sub-ppb, dengan carryover rendah dan presisi stabil di seluruh urutan injeksi yang panjang.
| Item | Konfigurasi |
|---|---|
| Sistem LC-MS/MS | Wanyi LCMS-TQ9200 triple quadrupole |
| Kolom analitik | C18, 1,6 um, 2,1 x 100 mm |
| Fase gerak A | 0,1% asam format dalam air |
| Fase gerak B | 0,1% asam format dalam asetonitril |
| Laju alir | 0,3 mL/menit |
| Suhu kolom | 40 derajat C |
| Volume injeksi | 4 uL |
| Peralatan tambahan | Bak ultrasonik, pengaduk vortex, sentrifus berkecepatan tinggi, penangas air, evaporator nitrogen, timbangan analitik |
Timbang 2 g sampel (akurat hingga 0,05 g) ke dalam tabung sentrifus 50 mL, tambahkan 10 uL larutan kerja standar internal campuran 1 ug/mL, vortex selama 30 detik dan diamkan selama 10 menit. Tambahkan 15 mL etil asetat, vortex selama 2 menit dan sentrifus pada 10.000 rpm selama 5 menit. Pindahkan supernatan dan ulangi ekstraksi sekali lagi dengan tambahan 15 mL etil asetat. Gabungkan kedua ekstrak dan uapkan hingga kering di bawah nitrogen dalam penangas air bersuhu 25 derajat C.
Larutkan residu dalam 5 mL asam klorida 0,1 mol/L, vortex selama 1 menit, tambahkan 5 mL n-heksana, kocok selama 1 menit dan sentrifus pada 5.000 rpm selama 5 menit. Buang lapisan heksana dan ulangi langkah penghilangan lemak sekali lagi dengan 5 mL heksana. Kondisikan kartrid ekstraksi fase padat dengan 3 mL asam klorida 0,1 mol/L dan 3 mL metanol, masukkan lapisan air, cuci dengan 3 mL asam klorida 0,1 mol/L dan elusi dengan 4 mL metanol. Uapkan eluat hingga kering pada suhu 35 derajat C di bawah nitrogen, rekonstitusi dalam 0,5 mL air, vortex selama 1 menit dan saring sebelum injeksi.
| Parameter | Hasil |
|---|---|
| Waktu analisis | Empat analit ditambah standar internal terpisah dalam waktu 8 menit, puncak simetris, respons kuat |
| Linearitas | Kalibrasi yang dicocokkan dengan matriks pada 2, 4, 20, 40, 200, dan 400 ug/L; R2 di atas 0,9995 untuk keempat senyawa, deviasi di bawah batas 20% |
| LOD dan LOQ | Rasio sinyal terhadap derau di atas 3 pada 0,5 ug/kg dan di atas 10 pada 1 ug/kg, memenuhi persyaratan LOD 0,5 ug/kg dan LOQ 1 ug/kg |
| Presisi (n = 6) | RSD di bawah 6% pada 2 ng/mL dan di bawah 3% pada 20 ng/mL, terhadap batas 10% |
| Carryover | Injeksi blanko setelah standar tertinggi 400 ng/mL jauh di bawah 20% dari area puncak LOQ |
| Pemulihan spike | 61,8% hingga 103,35% pada 2 ng/mL dan 104,35% hingga 107,15% pada 20 ng/mL, dalam persyaratan 60% hingga 120% |
| Sampel daging babi asli | Tidak ada dari keempat nitroimidazol yang terdeteksi |
Kalibrasi yang dicocokkan dengan matriks dalam ekstrak daging babi blanko mengkompensasi penghambatan ion dari matriks daging dan menjaga kuantifikasi tetap andal pada tingkat jejak. Bentuk puncak baik tanpa ekor, mengkonfirmasi bahwa ekstraksi etil asetat, penghilangan lemak heksana, dan pembersihan SPE menghilangkan gangguan pada 1 ug/kg.
Sistem LC-MS/MS Wanyi LCMS-TQ9200 memberikan metode yang tervalidasi untuk empat residu nitroimidazol dalam daging babi sesuai dengan GB 31658.23-2022. Puncak simetris, R2 di atas 0,9995, presisi dalam 10%, carryover yang dapat diabaikan, dan pemulihan dalam 60% hingga 120% menunjukkan bahwa alur kerja memenuhi persyaratan kualitatif dan kuantitatif rutin untuk penyaringan dan konfirmasi obat hewan terlarang, dan memberikan dasar teknis yang dapat diandalkan untuk pemantauan risiko keamanan pangan.
- Akuisisi MRM triple quadrupole memberikan selektivitas yang diperlukan untuk mengkonfirmasi residu terlarang pada 0,5 ug/kg dalam matriks daging berlemak.
- Kimia C18 di bawah 2 um pada kolom 2,1 mm pada 0,3 mL/menit memisahkan empat analit dalam waktu kurang dari 8 menit, dengan konsumsi pelarut rendah.
- Standar internal berlabel isotop mengoreksi kerugian pemulihan selama ekstraksi dan SPE, menstabilkan hasil di seluruh batch.
- Penghilangan lemak heksana sebelum SPE melindungi kartrid dan kolom analitik, memperpanjang masa pakai di laboratorium residu throughput tinggi.
