Sebagai nukleotida, Uridine 5'-monofosfat (UMP) adalah perantara penting dalam metabolisme asam nukleat dalam organisme hidup. Ini adalah nukleotida yang paling melimpah dalam susu mamalia, dan kebutuhan diet untuk uridilat secara signifikan lebih tinggi daripada nukleotida lain selama pertumbuhan dan perkembangan keturunan. Dalam beberapa tahun terakhir, penelitian telah mengungkapkan bahwa UMP tidak hanya berpartisipasi dalam metabolisme energi dan sintesis RNA tetapi juga meningkatkan fungsi penghalang usus dengan memodulasi jalur pensinyalan seluler. Lebih lanjut, ia bekerja secara sinergis dengan vitamin yang larut dalam lemak untuk meningkatkan penyerapan nutrisi dan fungsi kekebalan tubuh. UMP umumnya ditambahkan sebagai penguat nutrisi pada susu formula bayi dan pakan ternak/unggas, di mana kemurnian dan konsentrasinya secara langsung memengaruhi nilai gizi dan keamanan produk akhir.
Kata kunci:Penguat nutrisi makanan, UMP, Nukleotida, Kromatografi cair kinerja tinggi.
1. Instrumen dan Reagen
1.1 Daftar Konfigurasi HPLC
Tabel 1 Daftar Konfigurasi HPLC
| No. |
Modular |
Jumlah |
| 1 |
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi LC3200 |
1 |
| 2 |
Pompa Tekanan Tinggi Biner P3210B |
1 |
| 3 |
Oven Kolom CT3400 |
1 |
| 4 |
Autosampler AS3210 |
1 |
| 5 |
Detektor UV3210 UV |
1 |
| 6 |
Workstation SmartLab CDS 2.0 |
1 |
| 7 |
Nova Element AQC18 5μm 4.6*250mm |
1 |
1.2 Reagen dan Standar
Tabel 2 Daftar Reagen dan Standar
| No. |
Reagen dan Standar |
Kemurnian |
| 1 |
5'-monofosfat |
96.2% |
| 2 |
Uridine |
98% |
| 3 |
Urasil |
98% |
1.3 Bahan Percobaan dan Peralatan Tambahan
Pembersih Ultrasonik
Pengocok Vortex
2. Metode dan Kondisi Percobaan
Kolom Kromatografi: Nova Element AQC18, 5μm 4.6x250mm.
3. Hasil Percobaan
3.1 Uji Kesesuaian Sistem
Uji kesesuaian sistem menunjukkan bahwa puncak target berbentuk baik, dengan jumlah pelat teoretis yang tinggi dan tidak ada puncak yang mengganggu di sekitarnya, sehingga memenuhi semua persyaratan percobaan.
Gbr 1 Kromatogram Larutan Kerja Standar Uridine 5'-Monofosfat
Tabel 3 Hasil Uji untuk Larutan Kerja Standar Uridine 5'-Monofosfat
| Senyawa |
Waktu Retensi (menit) |
Luas Puncak (mAU*s) |
Tinggi Puncak |
Faktor Ekor |
Jumlah Pelat Teoretis |
| UMP |
5.559 |
322.525 |
55.643 |
1.130 |
23689 |
3.2 Pengujian Ulang
Larutan kerja standar Uridine 5'-Monofosfat (UMP) disuntikkan enam kali. Simpangan baku relatif (RSD) dari waktu retensi adalah 0.085%, dan dari luas puncak adalah 0.191%. Kedua nilai tersebut berada di bawah batas yang ditentukan sebesar 2.0%, menunjukkan kepatuhan terhadap persyaratan percobaan.
Gbr 2 Kromatogram Uji Ulang Uridine 5'-Monofosfat (UMP)
Tabel 4 Hasil Pengujian Ulang untuk Uridine 5'-Monofosfat (UMP)
| Senyawa |
Waktu Retensi(menit) |
Luas Puncak(mAU*s) |
| Uridine 5'-Monofosfat |
5.559 |
322.525 |
| 5.559 |
323.013 |
| 5.559 |
323.958 |
| 5.561 |
322.753 |
| 5.568 |
323.072 |
| 5.569 |
322.141 |
| RSD(%) |
0.085 |
0.191 |
3.3 Uji Sampel
Luas puncak larutan kerja standar 5'-uridin monofosfat (20mg/L) adalah 322.525, sedangkan luas puncak larutan sampel uji adalah 274.211. Berdasarkan metode standar eksternal, kandungan UMP dalam sampel ditentukan sebesar 17mg/L.
Gbr 3 Kromatogram Sampel Uji
Tabel 5 Hasil Uji Sampel
| Senyawa |
Waktu Retensi(menit) |
Luas Puncak(mAU*s) |
Tinggi Puncak |
SNR |
Jumlah Pelat Teoretis |
| 5'-uridin monofosfat |
5.568 |
274.211 |
47.321 |
14710.024 |
24266 |
3.4 Uji Kesesuaian Sistem untuk Zat Terkait
Uji larutan kesesuaian sistem untuk zat terkait menunjukkan bahwa semua puncak senyawa berbentuk baik, dengan jumlah pelat teoretis yang tinggi dan resolusi lebih besar dari 2.0, sehingga memenuhi persyaratan percobaan.
Gbr 4 Kromatogram Larutan Kerja Standar 5'-uridin Monofosfat (UMP)
Tabel 6 Hasil Uji untuk Larutan Kerja Standar 5'-uridin Monofosfat (UMP)
| Senyawa |
Waktu Retensi(menit) |
Luas Puncak(mAU*s) |
Tinggi Puncak |
Faktor Ekor |
Jumlah Pelat Teoretis |
| 5'-uridin Monofosfat |
5.570 |
326.631 |
8.682 |
1.121 |
24708 |
| Urasil |
7.097 |
839.625 |
28.844 |
1.033 |
18284 |
| Uridine |
17.367 |
446.693 |
n.a. |
0.995 |
19136 |
3.5 Uji Keterulangan Sampel
Setelah enam kali injeksi berturut-turut dari larutan kesesuaian sistem, pengulangan waktu retensi untuk 5'-UMP, urasil, dan uridin adalah 0.031%, 0.058%, dan 0.102%, secara berurutan, sedangkan pengulangan luas puncak adalah 0.243%, 0.134%, dan 0.134%, secara berurutan, memenuhi persyaratan percobaan.
Gbr 5 Kromatogram Uji Keterulangan Sampel
Tabel 7 Hasil Uji untuk Pengulangan Waktu Retensi Zat Terkait
| Senyawa |
5'-uridin Monofosfat |
Urasil |
Uridine |
| Waktu Retensi (menit) |
5.570 |
7.097 |
17.367 |
| 5.573 |
7.092 |
17.371 |
| 5.571 |
7.089 |
17.360 |
| 5.570 |
7.093 |
17.380 |
| 5.570 |
7.091 |
17.363 |
| 5.574 |
7.100 |
17.048 |
| RSD (%) |
0.031 |
0.058 |
0.102 |
Tabel 8 Hasil Uji untuk Pengulangan Luas Puncak Zat Terkait
| Senyawa |
5'-uridin Monofosfat |
Urasil |
Uridine |
| Luas Puncak |
326.631 |
839.625 |
446.693 |
| 326.175 |
841.410 |
447.261 |
| 326.126 |
841.330 |
447.299 |
| 327.412 |
842.394 |
448.319 |
| 327.832 |
841.747 |
447.324 |
| 327.850 |
842.911 |
448.083 |
| RSD (%) |
0.243 |
0.134 |
0.134 |
3.6 Uji Kepekaan untuk Zat Terkait
Rasio sinyal-ke-noise dari puncak utama 5'-UMP dalam larutan uji kepekaan untuk zat terkait secara signifikan lebih besar dari 3, memenuhi persyaratan percobaan.
Gbr 6 Kromatogram Larutan Uji Kepekaan Zat Terkait
Tabel 9 Hasil Uji Larutan Kepekaan Zat Terkait
| Senyawa |
Waktu Retensi(menit) |
Luas Puncak(mAU*s) |
Tinggi Puncak |
SNR |
Jumlah Pelat Teoretis |
| 5'-uridin Monofosfat |
5.573 |
26.797 |
4.638 |
949.156 |
24519 |
3.7 Pengujian Zat Terkait Referensi dan Larutan Sampel
Luas puncak larutan referensi (17 mg/L) adalah 275.856. Total luas puncak pengotor dalam larutan uji, tidak termasuk 5'-uridin monofosfat, adalah 38.021. Perhitungan dengan metode standar eksternal, kandungan pengotor dalam sampel adalah 2.343mg/L.
Gbr 7 Kromatogram Uji Larutan Referensi Zat Terkait
Tabel 10 Hasil Uji Larutan Referensi Zat Terkait
| Senyawa |
Waktu Retensi(menit) |
Luas Puncak(mAU*s) |
Tinggi Puncak |
SNR |
Jumlah Pelat Teoretis |
| 5'-uridin Monofosfat |
5.572 |
275.856 |
47.414 |
14576.232 |
24512 |
Gbr 8 Kromatogram Uji Larutan Sampel Zat Terkait
Tabel 11 Hasil Uji untuk Larutan Sampel Terkait
| Senyawa |
Waktu Retensi (menit) |
Luas Puncak (mAU*s) |
Tinggi Puncak |
SNR |
Jumlah Pelat Teoretis |
| 1 |
3.847 |
7.952 |
1.412 |
433.935 |
114734.178 |
| 2 |
4.178 |
4.358 |
0.710 |
218.248 |
11310 |
| 5'-uridin Monofosfat |
5.548 |
12576.642 |
1964.994 |
603778.520 |
196687.093 |
| Urasil |
7.093 |
218.727 |
26.939 |
8277.393 |
18342 |
| Uridine |
17.355 |
2810.366 |
145.230 |
44624.340 |
19058 |
4. Kesimpulan
Dalam percobaan ini, dengan mengacu pada "GB 1903.69-2024 Standar Keamanan Pangan Nasional: Penguat Nutrisi Pangan 5'-Uridine Monofosfat," analisis dilakukan menggunakan sistem kromatografi cair kinerja tinggi Wayeal LC3200 yang dilengkapi dengan detektor ultraviolet. Hasil percobaan menunjukkan bahwa uji kesesuaian sistem menunjukkan bentuk puncak yang baik untuk semua senyawa, jumlah pelat teoretis yang tinggi, dan resolusi di atas 2.0, memenuhi persyaratan percobaan. Pengulangan waktu retensi untuk larutan kerja standar 5'-Uridine Monofosfat dan zat terkait berada di bawah 0.2%, dan pengulangan luas puncak berada di bawah 0.3%, menunjukkan reproduktifitas yang baik. Larutan uji kepekaan untuk zat terkait menunjukkan rasio sinyal-ke-noise untuk puncak utama 5'-Uridine Monofosfat secara signifikan lebih besar dari 3, memenuhi persyaratan percobaan. Semua hasil uji sampel normal. Data di atas memenuhi persyaratan instrumen yang ditentukan dalam metode standar.
Pesan Anda harus antara 20-3.000 karakter!
