Penentuan Metionin Hidroksi Analog dalam Pakan dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi Wayeal

Metionin Hidroksi Analogi (MHA) adalah aditif asam organik yang banyak digunakan dalam industri pakan sebagai pengganti metionin. MHA banyak digunakan dalam pakan unggas (broiler dan petelur), babi (anak babi dan babi penggemukan), ruminansia (sapi perah dan sapi potong), dan akuakultur (ikan dan udang). Sebagai pengganti metionin, MHA menunjukkan efek signifikan dalam mengurangi biaya pakan, memperbaiki lingkungan usus hewan, dan meningkatkan kekebalan hewan.

Kromatografi cair kinerja tinggi yang digabungkan dengan deteksi UV sangat cocok untuk analisis berbagai sampel pakan yang kompleks, karena efisiensi pemisahannya yang sangat baik, ketahanan yang kuat terhadap interferensi matriks, sensitivitas deteksi yang tinggi, dan hasil kuantitatif yang stabil dan andal. Eksperimen ini dilakukan sesuai dengan standar "Penentuan Metionin Hidroksi Analogi dalam Pakan dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi" (GB/T 19371-2025). Kromatograf cair kinerja tinggi seri Wayeal LC3400 yang dilengkapi dengan detektor UV digunakan untuk memvalidasi prosedur pra-perlakuan sampel dan sistem pemisahan serta deteksi kromatografi cair, yang memungkinkan deteksi kualitatif dan analisis kuantitatif yang tepat dari metionin hidroksi analogi dalam berbagai jenis sampel pakan.

Kata Kunci: pakan; metionin hidroksi analogi; kromatografi cair kinerja tinggi.

1. Instrumen dan Reagen

1.1 Daftar Konfigurasi HPLC

Tabel 1 Daftar Konfigurasi Sistem Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

1.2 Daftar Reagen dan Standar Referensi

Tabel 2 Daftar Reagen dan Standar Referensi

1.3 Kondisi Kromatografi Cair

Tabel 3 Kondisi Kromatografi Cair Kinerja Tinggi

1.4 Bahan Eksperimental dan Peralatan Bantu

Pembersih ultrasonik;

Pengaduk vortex;

Sentrifus berkecepatan tinggi;

Timbangan analitik;

Pengocok.

2. Metode Eksperimen

2.1 Persiapan Larutan

2.1.1 Larutan Kurva Standar:

Timbang secara akurat sejumlah standar referensi Metionin Hidroksi Analogi yang sesuai dan larutkan dalam 10% asetonitril untuk menyiapkan serangkaian larutan standar dengan konsentrasi massa 0,5, 1,0, 2,0, 5,0, 10,0, 20,0, 40,0, dan 80,0μg/mL. Pindahkan secara akurat 5mL dari setiap larutan standar ke dalam tabung reaksi bertutup 15mL secara terpisah. Tambahkan 0,1mL larutan kalium hidroksida 50% secara akurat, dan vortex selama 15 detik. Kemudian tambahkan secara akurat 0,2mL larutan asam fosfat 50%, dan vortex selama 15 detik lagi. Sentrifus pada 8000r/menit selama 5 menit. Lewatkan supernatan melalui filter membran mikropori sebelum analisis.

2.1.2 Larutan Sampel Uji:

Timbang 5g sampel pakan ke dalam wadah, tambahkan 50mL larutan asetonitril 10%, dan aduk selama 30 detik. Letakkan pada pengocok dan kocok selama 30 menit. Sentrifus pada 8000r/menit selama 5 menit, dan simpan supernatan untuk digunakan nanti. Pindahkan secara akurat 5mL supernatan di atas ke dalam tabung reaksi bertutup 15mL. Tambahkan secara akurat 0,1mL larutan kalium hidroksida 50% dan vortex selama 15 detik. Kemudian tambahkan secara akurat 0,2mL larutan asam fosfat 50% dan vortex selama 15 detik lagi. Sentrifus pada 8000r/menit selama 5 menit. Lewatkan supernatan melalui filter membran mikropori sebelum analisis. Siapkan dua larutan sampel uji paralel.

2.1.3 Larutan Uji Pemulihan:

Pindahkan secara akurat 2,5mL supernatan sampel dan 2,5mL dari setiap larutan seri standar ke dalam tabung reaksi bertutup 15mL. Tambahkan secara akurat 0,1mL larutan kalium hidroksida 50% dan vortex selama 15 detik. Kemudian tambahkan secara akurat 0,2mL larutan asam fosfat 50% dan vortex selama 15 detik lagi. Sentrifus pada 8000r/menit selama 5 menit. Lewatkan supernatan melalui filter membran mikropori sebelum analisis.

3. Hasil Eksperimen

3.1 Linearitas dan Rentang

Tabel 4 Tabel Konsentrasi Kurva Standar

Gbr 1 Kurva Standar Metionin Hidroksi Analogi

Catatan: Sejumlah larutan standar referensi Metionin Hidroksi Analogi yang sesuai diambil dan diencerkan secara seri ke dalam serangkaian konsentrasi untuk persiapan kurva standar. Rentang linier adalah 0,5–80,0 μg/mL, dan koefisien korelasi (R) adalah 0,99983, menunjukkan linearitas yang sangat baik untuk analit.

3.2 Presisi

Gbr 2 Kromatogram Tumpang Tindih Uji Presisi untuk Standar Referensi (20,0μg/mL)

Tabel 5 Data Uji Presisi untuk Standar Referensi (20,0μg/mL)

Catatan: Standar referensi Metionin Hidroksi Analogi (pada konsentrasi 20,0μg/mL) diinjeksikan secara terus menerus sebanyak 6 kali pengulangan. Pengulangan (RSD) waktu retensi adalah 0,084%, dan luas puncak adalah 0,391%, menunjukkan presisi instrumen yang baik.

3.3 Pemulihan

Gbr 3 Kromatogram Tumpang Tindih Uji Pemulihan Metionin Hidroksi Analogi dalam Pakan

Tabel 6 Data Uji Pemulihan Metionin Hidroksi Analogi dalam Pakan

Catatan: Sampel ditambahkan standar referensi pada konsentrasi 40,0μg/mL dan dianalisis mengikuti prosedur yang dijelaskan di atas. Pemulihan yang diperoleh adalah 88,56%, menunjukkan akurasi metode yang baik.

3.4 Batas Deteksi (LOD)

Gbr 4 Kromatogram Standar Metionin Hidroksi Analogi (2,5μg/mL)

Tabel 7 Data Uji Standar Referensi Metionin Hidroksi Analogi (2,5μg/mL)

Catatan: Berdasarkan data uji standar referensi Metionin Hidroksi Analogi pada 2,5μg/mL seperti yang ditunjukkan pada tabel di atas, batas deteksi teoritis (LOD) dihitung sebesar 0,033μg/mL pada rasio sinyal-ke-derau 3 (S/N = 3).

3.5 Uji Sampel Pakan

Gbr 5 Kromatogram Sampel Pakan

Catatan: Metionin Hidroksi Analogi terdeteksi dalam sampel pakan pada konsentrasi 0,402μg/mL.

4. Kesimpulan

Eksperimen ini dilakukan sesuai dengan standar "Penentuan Metionin Hidroksi Analogi dalam Pakan dengan Kromatografi Cair Kinerja Tinggi" (GB/T 19371-2025), menggunakan kromatograf cair kinerja tinggi seri Wayeal LC3400 yang dilengkapi dengan detektor UV. Hasil eksperimen menunjukkan bahwa puncak target menunjukkan simetri yang baik dan jumlah pelat teoritis yang tinggi. Dalam rentang konsentrasi 0,5–80,0μg/mL, koefisien korelasi (R) di atas 0,9998. Nilai RSD untuk waktu retensi dan luas puncak standar referensi MHA (20,0μg/mL) masing-masing adalah 0,084% dan 0,391%, menunjukkan presisi instrumen yang sangat baik. Pemulihan MHA dalam sampel pakan yang ditambahkan pada 40,0μg/mL adalah 88,56%, menunjukkan akurasi metode yang baik. Batas deteksi teoritis (LOD) untuk MHA ditentukan sebesar 0,033μg/mL. MHA berhasil terdeteksi dalam sampel pakan pada konsentrasi 0,402μg/mL. Semua data di atas memenuhi persyaratan metode farmakope untuk kinerja instrumen.