Penentuan residu β-agonist dalam daging babi dengan menggunakan Wayeal LCMS-TQ9200 Sistem Kromatografi Cairan-Tandem Mass Spectrometry

Percobaan ini mengacu pada "SN Standar Keamanan Pangan Nasional GB 31658.22-2022 — Penentuan Residu β-Agonis dalam Pangan Berasal dari Hewan dengan Kromatografi Cair-Tandem Spektrometri Massa" dan menggunakan sistem kromatografi cair-tandem spektrometri massa Wayeal LCMS-TQ9200 untuk menentukan kandungan β-agonis dalam daging babi. Hasil percobaan menunjukkan bahwa uji kesesuaian sistem menunjukkan puncak yang berbentuk baik dan linearitas yang baik, memenuhi persyaratan percobaan. Pengulangan waktu retensi untuk larutan kerja standar β-agonis di bawah 1%, dan pengulangan luas puncak kurang dari 3%, menunjukkan pengulangan yang baik. Untuk larutan uji sensitivitas β-agonis, rasio sinyal-ke-noise dari puncak utama pada konsentrasi 0,2ng/mL dan 0,5ng/mL secara signifikan lebih besar dari 3 dan 10, masing-masing, memenuhi persyaratan percobaan.

Tidak ada β-agonis yang terdeteksi dalam uji sampel daging babi. Semua data di atas memenuhi persyaratan instrumen yang ditentukan oleh metode standar.

Kata kunci:Kromatografi Cair-Tandem Spektrometri Massa; β-Agonis; Klenbuterol; Keamanan Pangan.

1. Instrumen dan Reagen

1.1 Daftar Konfigurasi LCMS

Tabel 1 Daftar Konfigurasi Instrumen

1.2 Reagen dan Standar

Tabel 2 Daftar Reagen dan Standar

1.3 Bahan Percobaan dan Peralatan Tambahan

Pembersih Ultrasonik

Pengaduk Vortex

Pengocok Suhu Konstan Penangas Air

Sentrifus Kecepatan Tinggi

2. Metode Percobaan

2.1 Perlakuan Awal Sampel

2.1.1 Hidrolisis Enzimatis dan Ekstraksi

Timbang 2g sampel (akurat hingga ±0,05g) ke dalam tabung sentrifus 50mL. Tambahkan 6mL larutan buffer amonium asetat 0,2mol/L dan 40μL β-glukuronidase/arilsulfatase. Vortex untuk mencampur secara menyeluruh, dan inkubasi pada suhu 37°C di tempat gelap dengan pengocokan dalam penangas air selama 16 jam. Biarkan dingin hingga suhu ruangan untuk penggunaan selanjutnya.

2.1.2 Ekstraksi, Pemurnian, dan Konsentrasi

Ambil larutan yang telah disiapkan, tambahkan 100μL larutan kerja standar internal 100ng/mL, vortex untuk mencampur secara menyeluruh, dan sentrifus pada 8000r/menit selama 8 menit. Kumpulkan supernatan, tambahkan 5mL larutan asam perklorat 0,1mol/L, vortex untuk mencampur, dan sesuaikan pH menjadi 1,0 ± 0,2 menggunakan asam perklorat. Setelah sentrifugasi pada 8000r/menit selama 8 menit, sesuaikan pH supernatan menjadi 10 ± 0,5 menggunakan larutan natrium hidroksida 10mol/L. Tambahkan 15mL etil asetat, kocok dengan kecepatan sedang selama 5 menit, dan sentrifus pada 5000r/menit selama 5 menit. Kumpulkan lapisan organik atas. Ke lapisan berair yang tersisa, tambahkan 10mL tert-butil metil eter, kocok dengan kecepatan sedang selama 5 menit, sentrifus pada 5000r/menit selama 5 menit, dan kumpulkan lapisan organik atas. Gabungkan semua lapisan organik dan uapkan hingga kering di bawah aliran nitrogen pada suhu 50°C. Larutkan residu dalam 5mL larutan asam format 2% dan sisihkan. Siapkan kolom ekstraksi fase padat penukar kation campuran dengan mengaktifkannya secara berurutan dengan 3mL metanol dan 3mL asam format 2%. Muat larutan yang telah disiapkan ke kolom, bilas secara berurutan dengan 3mL asam format 2% dan 3mL metanol, dan keringkan di bawah vakum. Elusi kolom dengan 3mL larutan metanol amoniak 5%. Uapkan eluat hingga kering di bawah aliran nitrogen pada suhu 50°C. Larutkan kembali residu dalam 0,5mL larutan metanol–asam format 0,1% (10:90, v/v), campur secara menyeluruh, dan saring melalui membran mikropori 0,22μm untuk analisis dengan kromatografi cair-tandem spektrometri massa.

2.2 Kondisi Percobaan

2.2.1 Kondisi Kromatografi Cair

Kolom kromatografi” C18, 1,8μm 2,1*100mm

Fase gerak : A : Asam Format 0,1% dalam Air; B: Metanol

Laju alir: 0,3 mL/menit

Suhu kolom: 40°C

Volume injeksi: 3μL

3.Uji Kesesuaian Sistem

Uji kesesuaian sistem menunjukkan bahwa puncak target berbentuk baik tanpa gangguan dari puncak pengotor lainnya, memenuhi persyaratan percobaan.

Gbr 1 Kromatogram Uji Tujuh β-Agonis (1ng/mL)

3.2 Rentang Linear

Mengambil larutan standar β-agonis dan menggunakan larutan kerja konsentrasi menengah, kurva standar disiapkan secara bertahap. Rentang linear untuk tujuh β-agonis adalah 0,5–50ng/mL, dengan R² > 0,99, menunjukkan hubungan linear yang baik.

Tabel 3 Tabel Rentang Linear untuk β-Agonis

Gbr 2 Kromatogram Kurva Standar Tujuh β-Agonis

3.3 Batas Deteksi (LOD) dan Batas Kuantifikasi (LOQ)

Dalam metode ini, batas deteksi (LOD) dan batas kuantifikasi (LOQ) untuk β-agonis diatur pada 0,2ng/mL dan 0,5ng/mL, masing-masing. Untuk setiap senyawa dalam metode ini, rasio sinyal-ke-noise pada konsentrasi yang ditentukan untuk LOD dan LOQ lebih besar dari 3 dan 10, masing-masing, memenuhi persyaratan sensitivitas percobaan.

Tabel 4 Rasio Sinyal-ke-Noise yang Sesuai untuk LOD dan LOQ dari Setiap Senyawa

Gbr 3 Kromatogram Ion Tujuh β-Agonis pada Konsentrasi LOD dan LOQ

3.4 Uji Presisi

Larutan campuran zat standar β-agonis pada konsentrasi rendah, sedang, dan tinggi diambil dan disuntikkan secara berurutan enam kali untuk membandingkan penyimpangan waktu retensi dan luas puncak. Hasilnya ditunjukkan pada tabel di bawah ini. Semua β-agonis menunjukkan penyimpangan waktu retensi kurang dari 1% dan penyimpangan luas puncak kurang dari 3%, memenuhi persyaratan percobaan.

Tabel 5 Uji Presisi untuk Setiap Senyawa

Gbr 4 Kromatogram Pengujian Presisi Tujuh β-Agonis (6 Injeksi)

3.5 Uji Sampel

Sampel daging babi yang dibeli dari pasar diuji sesuai dengan metode perlakuan awal yang disebutkan, dan tidak ada β-agonis yang terdeteksi. Tidak ada puncak kromatografi yang diamati pada waktu retensi yang sesuai dengan tujuh β-agonis, sementara puncak lainnya mewakili sinyal matriks setelah hidrolisis enzimatis.

Gbr 5 Kromatogram Uji Sampel Daging Babi

4. Kesimpulan

Metode ini menggunakan sistem kromatografi cair-tandem spektrometri massa Wayeal LCMS-TQ9200 untuk penentuan β-agonis dalam daging babi. Data menunjukkan bahwa semua puncak kromatografi menunjukkan bentuk yang baik tanpa ekor, sensitivitas memenuhi persyaratan percobaan, koefisien korelasi linear melebihi 0,99, dan presisi memuaskan dengan penyimpangan waktu retensi di bawah 1% dan penyimpangan luas puncak dalam 3% untuk enam injeksi berurutan dari setiap senyawa. Tidak ada β-agonis yang terdeteksi dalam uji sampel daging babi. Hasil ini menunjukkan bahwa metode tersebut, yang dilengkapi dengan sistem Wayeal LC-MS/MS, memenuhi persyaratan deteksi kualitatif dan kuantitatif rutin untuk analit target.